تغییر دادن و بیشتر رنگ کلم قرمز در محیط اسیدی و بازی FDC مورد استفاده در داروسازی، ماهیت مصنوعی دارند و هیچ خاصیت شاخصی ندارند و بنابراین، ما فرض کردیم که رنگ قرمز کلم می تواند یک pHindicator بالقوه برای چنین سیستم هایی باشد.
به منظور آزمایش این فرضیه، ما این شاخص را در محلول آبی کلربوتول به عنوان یک سیستم مدل آزمایش کردیم دانستن ثابت‌های یونیزاسیون برای یک pHindicator برای استفاده از آن در عمل ضروری است.
ثابت یونیزاسیون را می توان با استفاده از روش های مختلف مانند پتانسیومتری، اسپکتروفتومتری، حلالیت، دماسنجی و همچنین روش های دیگر تعیین کرد هدف از این مطالعه: تعیین ثابت یونیزاسیون (pKa) رنگ کلم قرمز با استفاده از روش اسپکتروفتومتری، ارزیابی اثر دما و pH بر پایداری این رنگ در محلول آبی و بررسی اثربخشی این عامل رنگ‌دهنده به عنوان pH بیشتر آنتوسیانین های طبیعی به صورت گلیکوزید ظاهر می شوند و حاوی یکی از چندین هسته آگلیکون هستند.
قسمت آگلیکون کلکسی قرمز سیانیدین است و در هر دو موقعیت 3 و 5 به بخش کربوهیدرات متصل است این هسته مخروطی شکل می تواند به عنوان یک یون اکسونیوم با بار مثبت وجود داشته باشد و به عنوان محلول غیر اسیدی کاتیون فلاویلیوم نامیده می شود همانطور که در شکل نشان داده شده است.
اثر دما و pH بر پایداری رنگ قرمز کلم در سه دمای مختلف مورد بررسی قرار گرفت و محلول های قرمز کلم در سه غلظت مختلف در محلول های بافر تهیه شد نمونه‌ها در بطری‌های درپوش پیچی نگهداری شدند و به‌طور مداوم (با سرعت 80 دور در دقیقه) در حمام آب لرزاننده متقابل با دمای کنترل شده به مدت 10 روز تکان داده شدند.
جذب محلول در طول موج 536 نانومتر بررسی شد و تخریب رنگ قرمز کلم در یک زمان خاص با محاسبه تغییر در غلظت آن از درصد غلظت اولیه تعیین شد و داده های ارائه شده نشان دهنده میانگین 9S.D. (n=3). رنگ در آب حاوی 0.5 درصد (وزنی/حجمی) کلربوتول تهیه شد و pH هر محلول در زمان صفر تعیین شد و اسکن های طیفی (l-scans) بلافاصله به دست آمد.
این محلول‌ها در ویال‌های سوسوزن کاملاً بسته و در دمای 60 درجه سانتی‌گراد در فر به مدت 24 ساعت نگهداری شدند و Spectralscans، pH و تغییر رنگ در صورت وجود از نظر بصری در ساعت 12 و 24 مشاهده شد.
تأثیر pH بر رنگ و شدت محلول قرمز کلم، محدوده pH 5.0 تا 8.0 برای این مطالعه انتخاب شد، زیرا در pH 5.0 این ترکیب به صورت گونه های مولکولی (شکل یونیزه) و در pH 8.0 به شکل یونیزه وجود دارد.
